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大鼠P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒的實驗使用說明書主要包括以下內(nèi)容：
BS-3514 大鼠P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒
1. 實驗原理
該試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。通過抗大鼠P450 scc單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的P450 scc與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠P450 scc，形成免疫復(fù)合物連接在板上。辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，P450 scc濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中P450 scc濃度?。
2. 試劑盒組成
試劑盒包含以下組分(2-8℃保存)：
標準品液
生物素化的抗大鼠P450 scc
辣根過氧化物酶標記的Streptavidin
底物工作液
終止液硫酸?。
3. 樣本處理及保存
血清/血漿?：收集后2-8℃保存48小時，更長時間需冷凍(-20℃或-70℃)保存，避免反復(fù)凍融?。
細胞培養(yǎng)上清液/組織勻漿?：盡早檢測，保存條件同上?。
4. 實驗步驟
準備試劑?：將試劑移至室溫平衡至少30分鐘?。
加樣?：分別設(shè)標準品孔和待測樣本孔，每孔加標準品或待測樣本100μL，37℃溫育2小時?。
洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡2分鐘?。
加生物素標記抗體?：每孔加生物素標記抗體工作液100μL，37℃溫育1小時?。
加辣根過氧化物酶標記親和素?：每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μL，37℃溫育1小時?。
顯色?：每孔加底物溶液90μL，37℃避光顯色15-30分鐘?。
終止反應(yīng)?：每孔加終止溶液50μL，終止反應(yīng)?。
讀板?：用酶標儀在450nm波長測定各孔的OD值?。
5. 注意事項
避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸請盡快用水沖洗?。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品?。
使用一次性吸頭避免交叉污染?。
洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水?。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下?。
6. 結(jié)果計算
通過繪制標準曲線，根據(jù)OD值計算樣品中P450 scc的濃度?。
7. 適用范圍
該試劑盒適用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中P450 scc的濃度，僅用于科研實驗，禁用于臨床?。
以上內(nèi)容綜合了多個相關(guān)網(wǎng)頁的信息，確保實驗操作的準確性和安全性?。
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