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人γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-0033人γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒
一、檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。將抗人IFN-γ單克隆抗體預包被于微孔板，依次加入樣本、標準品及生物素標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)洗滌后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)結(jié)合，通過TMB底物顯色。顏色深淺與樣本中IFN-γ濃度呈正相關(guān)，利用酶標儀測定吸光度(OD值)進行定量分析。
二、試劑盒組成
組分 96孔配置 48孔配置 保存條件
預包被微孔板 12孔×8條 12孔×4條 2-8℃
凍干標準品 1管 1管 2-8℃(復溶后-20℃)
生物素標記抗體 100μL 100μL 2-8℃(避光)
鏈霉親和素-HRP 100μL 100μL 2-8℃(避光)
樣本稀釋液 30mL 15mL 2-8℃
20×洗滌緩沖液 20mL 10mL 2-8℃
TMB底物液 10mL 5mL 2-8℃避光
終止液 10mL 5mL 2-8℃
封板膜 4張 2張 室溫
三、樣本要求
1. 樣本類型
血清/血漿?：使用EDTA或肝素抗凝，避免溶血。
細胞培養(yǎng)上清?：離心去除顆粒物，避免反復凍融。
其他生物體液?：如腦脊液、胸腹水，需澄清后檢測。
2. 樣本處理
稀釋比例?：血清/血漿建議1:5稀釋(樣本:稀釋液=1:4)，細胞上清建議1:2稀釋。
保存條件?：短期(≤7天)2-8℃保存，長期需分裝凍存于-80℃(避免反復凍融)。
四、實驗步驟
1. 試劑準備
洗滌液?：用蒸餾水將20×濃縮液稀釋為1×工作液(如20mL濃縮液+380mL水)。
標準品復溶?：凍干標準品加入1mL標準品稀釋液，靜置15分鐘，配成高濃度母液。
梯度稀釋?：取7支EP管，每管加500μL稀釋液，從母液轉(zhuǎn)移500μL至一管混勻，依次倍比稀釋(示例：1000→500→250→125→62.5→31.25→15.625 pg/mL)。
2. 加樣與溫育
每孔加入100μL標準品或稀釋后樣本(建議復孔檢測)。
37℃避光溫育90分鐘，封板膜密封。
3. 洗滌
甩盡孔內(nèi)液體，用1×洗滌液洗滌3次，每次浸泡1分鐘，拍干。
4. 顯色與終止
每孔加入100μL生物素標記抗體(提前用抗體稀釋液1:100稀釋)，37℃避光溫育60分鐘。
洗滌后，每孔加入100μL鏈霉親和素-HRP(提前用ABC稀釋液1:100稀釋)，37℃避光溫育30分鐘。
洗滌后，每孔加入100μL TMB底物液，37℃避光顯色15-20分鐘。
每孔加入50μL終止液終止反應(溶液由藍變黃)。
5. 測定
30分鐘內(nèi)用酶標儀測定450nm波長OD值(參考波長570-630nm)。
五、結(jié)果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線(四參數(shù)擬合)。
根據(jù)樣本OD值，通過回歸方程計算實際濃度，若樣本稀釋需乘以稀釋倍數(shù)。
六、性能指標
參數(shù) 指標
靈敏度 ≤1.0 pg/mL
檢測范圍 15.63–1000 pg/mL
精密度 板內(nèi)CV <10%
回收率 83%-113%
特異性 與人IL-2、IL-4等無交叉反應
七、注意事項
試劑保存?：未使用板條需密封保存于2-8℃，避免受潮;TMB底物液需避光。
樣本處理?：避免使用溶血、高血脂樣本;高濃度樣本需預實驗確定稀釋倍數(shù)。
操作規(guī)范?：
加樣時避免氣泡，槍頭需更換。
溫育時間嚴格控制在規(guī)定范圍內(nèi)，防止蒸發(fā)。
質(zhì)量控制?：每批次實驗需設空白孔(S0)及陰性對照。
安全提示?：終止液含酸，需戴手套操作;廢棄物按生物危害處理。
八、有效期
試劑盒在2-8℃下有效期為6個月，拆封后標準品建議分裝凍存于-20℃。
注：以上僅供參考，本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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